具有无限自我复制能力和向全身各种细胞分化能力的胚胎干细胞,通过向心肌细胞再生和细胞移植,成为现在细胞再生医疗研究的热点,有望代替心脏移植用于急性心肌梗死、扩张性心肌病等所致重症心功能不全的治疗。作为新的灵长类实验动物,狨猴具有许多优点更宜应用为临床前动物实验模型验证胚胎干细胞移植的合理性、安全性和有效性。
狨猴胚胎干细胞的心肌细胞诱导分化方法和细胞分化速度与小鼠胚胎干细胞有显著区别,类似于人胚胎干细胞。我们利用日本实验动物中央研究所佐佐木先生等建立的狨猴胚胎干细胞(Common Marmoset Embryonic Stem Cell,CMESC),在无动物血清的培养基中诱导分化心肌细胞。在诱导分化后12~15天,平均50%的胚胎样小体出现了自发性节律搏动,分析后证明自发性搏动细胞具有典型的心肌细胞结构。应用RT-PCR法解析从胚胎样小体形成到诱导分化为心肌细胞过程中的基因表达,显示狨猴胚胎干细胞的心肌细胞分化模式类似于人胚胎干细胞。我们应用微小电极法对诱导分化的心肌细胞进行电生理机能解析,证明了狨猴胚胎干细胞诱导分化的自发性搏动细胞是功能性的心肌细胞。
利用BrdU吸收实验,我们认识到当胚胎样小体被诱导分化为心肌细胞后,分散胚胎样小体,筛选心肌细胞,利用心肌细胞所具有的增殖能力,分散培养1~2周,可以获取4~8倍的心肌细胞。
我们在纤维蛋白膜上培养心肌细胞,成功制作了容易剥离的心肌细胞片。这个方法无须特殊设备,操作简单,且构成细胞片的心肌细胞表现出同期搏动。我们正尝试把心肌细胞片移植到免疫功能不全小鼠的心脏上,验证其生存能力,并且预备使用心肌细胞片的移植法来治疗心肌梗死的狨猴动物模型。